第一节　温度

环境温度对荧光染色有明显的影响。一般来说，溶液的荧光强度随温度的降低而增强，温度升高与荧光强度的减弱在一定范围内呈线性关系。温度升高，荧光强度减弱的原因主要是溶液的黏度减小，溶剂与溶质分子的动能增加，使得荧光分子的其他分子之间的碰撞概率增加，激发态荧光分子通过分子间碰撞或分子内能量的转移，将自己的能量转移出去。以非荧光发射的形式回到基态，造成荧光猝灭，量子产率（quantum yield）降低。如果溶液中有猝灭剂存在，则猝灭剂的作用也会随温度的升高而增大。

为了更加明确地表示温度与荧光减弱之间的关系，人们将温度升高时荧光减弱的百分率定义为温度系数（temperature coefficient，TC）。就一般荧光物质而言，温度系数大约等于1%，但有些荧光物质可大到5%。环境温度在20℃时，一般荧光染料即可出现温度猝灭反应，之后随温度的升高，荧光猝灭反应被加强，甚至造成荧光完全猝灭。环境温度在20℃以下，荧光量子产率无明显变化，基本上保持相对稳定。

因此，针对环境温度对荧光产生的猝灭反应，在进行临床流式细胞学检验的过程中，要求荧光染色及荧光染色后的反应管应在适当低温环境下放置，并尽可能使反应管避光保存。如果条件允许的话，应使环境温度维持在20℃以下并保持恒定，这样就可以将环境温度对荧光染色的影响降低到最低水平，确保流式检验的质量。当然，也可以采用恒温样品架维持样品温度的恒定，达到减少温度对荧光强度的影响的目的。